Defensa de Tesis Doctoral: “Genética molecular y biomarcadores de la enfermedad de Wilson”
Doctoranda: Ana Sánchez Monteagudo
Directores: Dra. Carmen Espinós, Dr. Vincenzo Lupo

La enfermedad de Wilson (EW) es un trastorno hereditario del metabolismo del cobre, causado por mutaciones en ATP7B que codifica para una proteína transportadora del cobre. Su mal funcionamiento provoca un fallo en la excreción biliar y la acumulación progresiva de este metal en el organismo, especialmente en hígado y cerebro.

“Estudios de caracterización genética en pacientes con fenotipo clínico de EW”

La serie clínica investigada comprendía 25 familias y en 22 de ellas se identificaron mutaciones bialélicas tras análisis del gen ATP7B. El estudio de mutaciones de splicing en ATP7B mediante análisis de transcritos o ensayo de minigenes, mostraron que cinco de ellas alterarían el correcto procesado generando una proteína anómala. La caracterización de una variante novel en el promotor de ATP7B mediante ensayo de luciferasa confirmó una reducción de la actividad del promotor en su presencia. En las tres familias de la serie pendientes de diagnóstico molecular, se secuenció el exoma. Una de ellas presentó mutaciones patológicas en CCDC115, implicado en un trastorno congénito de la glicosilación y asociado a fenotipos Wilson-like.

Dos familias con diagnóstico concluyente de EW y alta variabilidad intrafamiliar, se seleccionaron para estudio de modificadores genéticos mediante secuenciación de exoma. Se identificaron variantes candidatas en MYO5B, CCDC93 y COMMD1, genes que participan en el metabolismo del cobre y/o relacionados con ATP7B. El cribado mutacional de estos cambios en otros pacientes de la serie, no permitió establecer correlaciones genotipo-fenotipo que expliquen la variabilidad clínica apreciada. En el análisis comparativo de variantes identificadas, se detectó en una paciente el cambio p.R419C en LMNA, asociado a laminopatías. Estudios de la respiración mitocondrial y de inducción de estrés oxidativo en fibroblastos de la enferma mostraron una capacidad limitada de la célula para responder frente a situaciones adversas.

“Búsqueda de miRNAs circulantes en plasma como biomarcadores en la EW”

Se ha llevado a cabo la búsqueda de biomarcadores basados en el perfil de miRNAs circulantes en plasma útiles para monitorizar la progresión de la enfermedad. En una primera cohorte, se identificaron 18 miRNAs sobrerrepresentados en pacientes mediante miRNA-seq. Destacan cinco miRNAs previamente asociados a enfermedad hepática, metabolismo del hierro y lípidos. Análisis mediante qPCR en la misma cohorte así como en una segunda cohorte independiente, confirmaron que tres de ellos estaban incrementados en plasma de pacientes EW y que correlacionaban con marcadores bioquímicos de función hepática. Aplicando modelos de regresión logística, concluimos que los tres miRNAs de interés permiten la clasificación de pacientes con factores de evolución desfavorable, por tanto se proponen como candidatos para mejorar el seguimiento clínico o evaluar la efectividad de nuevas terapias en la EW.