Citómica

El Servicio de Citómica del CIPF incluye tecnología de última generación y equipos avanzados para análisis celular por  citometría de flujo policromático, separación celular (FACS) y análisis de imagen de alto contenido (HCS). El Servicio fue creado por el Dr. José Enrique O’Connor, profesor titular de la Universidad de Valencia y fundador de la citometría de flujo en España, en 1983.

El objetivo del Servicio de Citómica es apoyar el uso de su equipamiento por parte de grupos de investigación del CIPF, y también por grupos externos. La citometría de flujo y el análisis de imagen son técnicas útiles en la investigación biomédica básica y traslacional, así como  en otras disciplinas como la toxicología, la biología celular, la biotecnología, las ciencias ambientales y la microbiología.

El personal del Servicio de Citómica realiza el mantenimiento y el control de calidad de los equipos. Además, ofrecen soporte técnico para usar el equipamiento del Servicio, y soporte científico para desarrollar y aplicar esta tecnología a las diferentes aplicaciones propuestas por el personal investigador. El Servicio dispone de protocolos diseñados para aplicaciones definidas, y el personal ofrece la posibilidad de desarrollar protocolos personalizados para aplicaciones específicas.

El personal del Servicio de Citómica está involucrado en tareas de formación. Se organiza anualmente en el CIPF un curso de citometría de flujo básico, acreditado por la Comisión de Formación Continua de las Profesiones Sanitarias. Además, participa en la International Summer School on Cytometry organizada por la European Society for the Clinical Cell Analysis (ESCCA).

El equipo del Servicio de Citómica está formado por la Dra. Alicia Martínez-Romero y Domingo Gil Casanova.

  • Equipamiento y recursos
  • Servicios
  • Protocolos
  • Un citómetro de flujo Cytomics FC500 MCL (Beckman-Coulter, CA,USA) Equipado con un láser (488 nm) y 5 detectores de fluorescencia.
  • Un citómetro de flujo CytoFLEX S (Beckman-Coulter, CA, USA) Equipado con 4 láseres (405,488,561 y 635 nm) y 13 detectores de fluorescencia.
  • Un separador celular de alta velocidad MoFlo XDP (Beckman-Coulter, CA, USA). Equipado con tres láseres (351, 488 y 635 nm) y 8 detectores de fluorescencia. Este equipo permite la separación de cuatro poblaciones celulares simultáneamente.
  • Un sistema HCS IN Cell Analyzer 2200 (Cytiva, UK), capaz de adquirir y analizar imágenes de fluorescencia de manera rápida, donde se pueden realizar experimentos con células vivas a largo plazo (control de temperatura y CO2). Equipo con objetivo máximo de 40X y capacidad para adquirir 4 fluorescencias, campo claro y contraste de fase. Este sistema funciona con frascos de cultivo, placas de cultivo de diferentes formatos y portaobjetos.
  • Un sistema de imagen Cytell (Cytiva, UK). Equipo de sobremesa y auto-usuario, rápido y fácil de usar. Objetivo máximo de 10X y capacidad para adquirir 4 fluorescencias y campo claro. Este sistema funciona con frascos de cultivo, placas de cultivo de diferentes formatos y portaobjetos.

Un sistema de análisis de imagen Cyation 5 (BioTek, USA) Equipado con su propio incubador de células BioSpa 8 (BioTek, USA). La combinación de ambos equipos nos permite realizar experimentos de análisis de imagen a largo plazo, y de hasta 8 placas simultáneamente, combinando diferentes protocolos de lectura en el sistema de adquisición de imágenes. Se pueden realizar experimentos durante 1,2,3 semanas o más, manteniendo condiciones de cultivo celular estables a lo largo del tiempo.

El Servicio de Citómica  ofrece servicios a diferentes niveles según la preferencia del cliente:

  • Procesamiento de las muestras. Capacidad para manejar muestras de diferentes orígenes: líneas celulares inmortalizadas, cultivos primarios, muestras celulares y fluidos biológicos procedentes de tejidos, bacterias y algas. Conocimiento de protocolos optimizados según el diseño experimental.
  • Adquisición de las muestras en los diferentes equipos del Servicio: puesta a punto de protocolos de citometría de flujo y adquisición de muestras. Análisis de imagen para experimentos a punto final, y a lo largo del tiempo, manteniendo las muestras en condiciones estables de cultivo celular.
  • Separación celular para obtener poblaciones purificadas basadas en inmunofenotipo y/o características funcionales. Purificación de células raras de una muestra heterogénea. Separación celular de células eucariotas y procariotas. Clasificación de hasta 4 poblaciones simultáneamente. Separación con alta pureza. Elevada recuperación de células intactas/viables para estudios posteriores: PCR, secuenciación de ADN, cultivo celular, uso en modelos animales,…
  • Análisis e interpretación de los resultados. Los resultados procedentes de los experimentos de citometría de flujo y HCS son analizados por el personal del Servicio, utilizando programas informáticos específicos.
  • Asesoramiento en el diseño de experimentos.
  • Diseño e implementación de soluciones integrales.

Protocolos de citometría de flujo

  • Inmunofenotipado de muestras por citometría de flujo, para detectar la expresión de antígenos superficiales e intracelulares/intranucleares: diseño de experimentos multiparamétricos, hasta 13 marcadores fluorescentes, con compensación automática basada en fluoroesferas.
  • Análisis del ciclo celular: Disponibilidad para usar varias sondas de ADN con diferentes espectros de fluorescencia, en células vivas o fijadas. Capacidad para combinarlos con otros marcadores, para cuantificar simultáneamente el contenido de ADN y otras estructuras / funciones celulares.
  • Ensayos de citotoxicidad para evaluar la muerte celular e investigar vías específicas de apoptosis: anexina V/PI, detección de caspasa activa, detección de citocromo C.
  • Caracterización de la internalización y procesos endocíticos para nanopartículas, microvesículas, ...
  • Caracterización de vías de señalización intracelular.
  • Pruebas funcionales aplicadas a líneas celulares establecidas, cultivos primarios y muestras ex vivo: ensayos de estrés oxidativo, experimentos de potencial de membrana mitocondrial, detección de pH intracelular, calcio intracelular y determinación de otros iones.
  • Caracterización celular de microorganismos para aplicaciones en Biotecnología y Ciencias Ambientales.
  • Caracterización funcional e inmunofenotipo de células madre.
  • Análisis de parámetros cinéticos en tiempo real (análisis in Fluxo).
  • Detección y análisis de microvesículas/micropartículas. Capacidad para detectar partículas fluorescentes con un tamaño de 100 nm. Las microvesículas derivadas de cultivos celulares in vitro y de muestras ex vivo se pueden analizar utilizando el citómetro de flujo de alta sensibilidad CytoFLEX S.

 

Protocolos de análisis de imagen

Estudios de alto contenido (HCS) mediante técnicas de análisis de imágenes en cultivos celulares y secciones de tejidos. Detección y cuantificación de diferentes parámetros celulares. Ensayos de especial relevancia en los campos de toxicología y descubrimiento de fármacos. Control de temperatura y CO2, lo que permite experimentos a largo plazo con células vivas.

  • Adquisición y análisis de subestructuras celulares, células enteras, tejidos y esferoides.
  • Estudios de localización y tráfico de proteínas, translocación núcleo-citoplasma.
  • Experimentos de co-localización.
  • Estudios funcionales en células vivas: actividad mitocondrial, movimientos de iones, cambios de pH.
  • Crecimiento de neuritas y función neuronal.
  • Perfiles de fenotipo celular.
  • Análisis de subestructura nuclear.
  • Estudios de morfología de orgánulos.
  • Análisis de microtúbulos.
  • Análisis de la estructura mitótica y estudios del ciclo celular.
  • Ensayos de adhesión celular y migración.
  • Análisis a lo largo del tiempo.
  • Análisis de células madre.
  • Experimentos con estructuras multicelulares: colonias de células madre, esferoides para el descubrimiento de fármacos en la investigación del cáncer.

Contáctenos

    Alicia Martinez / Domingo Gil

    citomica@cipf.es

    963289680 ext. 5312