Cribado
Responsable científico del servicio: María Jesús Vicent
La plataforma del servicio de cribado del CIPF se creó para respaldar la evaluación de librerías de compuestos biológicos y farmacológicos, ya sean propias del CIPF o de entidades externas. Este servicio dispone de dos librerías de compuestos químicos (Myriad y Prestwick) que, en conjunto, contienen más de 11.000 compuestos. La librería Myriad es especialmente valiosa para el descubrimiento de nuevos fármacos, mientras que la Prestwick incluye compuestos que ya están en uso comercial. Estos últimos pueden tener dianas terapéuticas no descubiertas, ya sea individualmente o en combinación, que podrían acercar el objetivo de las terapias personalizadas.
El logro sobresaliente de la plataforma del servicio de cribado es la generación y el mantenimiento de colecciones de compuestos con una gran diversidad química. Uno de sus objetivos principales es obtener, identificar y caracterizar nuevos agentes bioactivos que modulan las interacciones proteína-proteína y/o proteína-ARN. Comprender estos elementos clave puede, por ejemplo, promover el desarrollo de ensayos de proliferación y diferenciación que utilizan células madre adultas o embrionarias para atacar patologías humanas.
La disponibilidad de las librerías de compuestos Myriad y Prestwick permite escalar los experimentos para realizar ensayos de cribado masivo de alto rendimiento (HTS) de modo que se puedan seleccionar los compuestos con la mayor actividad contra los objetivos terapéuticos de interés. Una vez que se identifican los compuestos de interés, el servicio ayuda a los investigadores a desarrollarlos más, de acuerdo con los objetivos específicos de la investigación. Por ejemplo, mediante la creación de sistemas de transporte (conjugados poliméricos) que mejorarán la solubilidad del compuesto activo o aumentarán su vida media en el torrente sanguíneo para lograr una mayor bioacumulación en tumores o zonas inflamadas, etc.
El servicio puede automatizar la captura directa de resultados de los sistemas de lectura y es capaz de realizar el procesamiento de datos en ensayos de alta densidad. Además, existen ensayos que se han ajustado para identificar compuestos que modulan las interacciones proteína-proteína o que promueven la proliferación y/o diferenciación de células madre embrionarias y adultas.
En 2019, han sido implementados avances significativos, que incluyen una aproximación trasladable para el cribado de inhibidores de la biogénesis y/o liberación de exosomas, que evita la necesidad de técnicas que requieren mucho tiempo, mejora la identificación de moduladores de exosomas con mecanismos moleculares específicos y facilita la traslación a la práctica clínica y al uso rutinario en el laboratorio.
Redes científicas
- Robot pipeteador automatic EvoTECAN Li-Ha MCA96 que puede realizar tanto cribados en formato de placa de 96 o 384 pocillos.
- Lector multiplaca ClarioStar con tecnología AlphaScreen y control atmosférico de BMG LABTECH.
- Lector multiplaca Ensight con tecnología Label-free de PerkinElmer.
- NanoSight-NTA NS300.
- Librería de compuestos Myriad y Prestwick.
- Cuarto de cultivos completamente equipado.
- Espacio dedicado a Bilogía Molecular para el estudio específico de mecanismos moleculares (por ejemplo; para western blots, PCRs, etc.).
- Laboratorio de síntesis química completamente equipado.
En muchos trastornos neurodegenerativos o procesos patológicos agresivos como el cáncer, se requieren aproximaciones de cribado farmacológico de alto rendimiento (HTS) para identificar nuevas terapias eficaces y seguras. Nuestra plataforma de cribado, utilizando tecnologías avanzadas complementarias que incluyen label-free, alpha-screen y técnicas de imagen, entre otras, puede identificar de manera rápida y confiable nuevos resultados. El CIPF es un sitio especializado que ofrece una diversidad de ensayos basados en células, desde líneas celulares disponibles comercialmente hasta modelos 3D derivados de pacientes. Los ensayos en cultivos organotípicos también están disponibles. La Plataforma de cribado también ayuda a los investigadores a desarrollar compuestos de interés, de acuerdo con sus objetivos específicos de investigación, por lo que ofrecen varios servicios:
- Cultivos celulares:
- Células eucariotas humanas, tanto modelos 3D como 2D.
- Cultivos celulares primarios, incluyendo células madre y modelos derivados de pacientes.
- Ensayos de Biología Molecular.
- Análisis de interacción Proteína–RNA.
- Actividad enzimática y estudios de competición incluyendo detección por fluorescencia polarizada.
- Actividad del factor inducible por hipoxia (HIF).
- Detección y cuantificación de la expresion de proteínas:
- Western blotting.
- Citometría de flujo.
- Immunocitoquímica.
- Técnicas de RNA y DNA incluyendo RT-PCR, PCR cuantitativa y semi-cuantitativa.
- Ensayos de Actividad Telomerasa.
- Análisis de actividad Antioxidante.
- Análisis de actividad Antienvejecimiento (servicio de cribado y citómica).
- Evaluación de traslocación a núcleo de factores de trasncripción (e.g. NFKB) (servicio de cribado y citómica).
- Estudios de Viabilidad–toxicidad:
- Ensayo MTT.
- Ensayo MTS.
- Ensayo ATP.
- Ensayos complementarios a los citotóxicos:
- Ciclo celular.
- Apoptosis y muerte celular.
- Ensayo de potencial de membrana mitocondrial (servicio de cribado y citómica).
- Procesamiento histológico completo para trabajos con experimentación animal (desde la separación de tejidos y órganos hasta el seccionado y tinción de los cortes histológicos).
- Diseño de ensayos en formato de alta densidad.
- Validación estadística de experimentos.
- Cribado masivo de colección de compuestos.
- Evaluación secundaria de los positivos seleccionados.
- Investigación de propiedad intelectual:
- Uso de los compuestos por otros competidores.
- Datos iniciales sobre la novedad del compuesto para su uso en la protección intelectual de derechos de autor.
- Desarrollo de química-médica (descubrimiento de fármacos ‘hit to lead’).
- Desarrollo de sistemas de transporte (conjugados poliméricos) para los compuestos seleccionados de interés.
- Validación de la actividad biológica en modelos animales.
- Caracterización de compuestos externos.
- Caracterización de partículas (tamaño y cantidad).
Contáctenos
Esther Masiá
cribado@cipf.es
963289680 ext. 2308
